Журнал. Вестник офтальмологии № 6 — 2020 г.

Original articles

Оригинальные статьи

метаболизма микроорганизма определяется на ос­ новании активности обмена фосфорных соедине­ ний, которая не оценивалась ранее в исследованиях по фотодинамике. Однако метод СЭМ с предвари­ тельным контрастированием обладает важным преи­ муществом — он позволяет оценивать одновременно два параметра состояния микроорганизма: морфоло­ гию и активность метаболизма. Для полной характе­ ристики действия зеленого излучения на микробные клетки необходимо исследование облученных микро­ организмов дополнительными методами. Выводы 1. Метод сканирующей электронной микроско­ пии с лантаноидным контрастированием позволяет оценивать жизнеспособность и функциональное со ­ стояние клеток микроорганизмов на основании опре­ деления их морфологических характеристик (формы и размера) и функциональных показателей (общей метаболической активности, активации эффлюкс- систем). 2. При исследовании облученных культур Staphy­ lococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Candida albi­ cans методом сканирующей электронной микроско­ пии (с лантаноидным контрастированием) показано повреждающее действие светового и УФА-излуче- ний на клетки микроорганизмов. Наибольшей ан ­ тимикробной активностью обладало излучение зе ­ леного спектра с длиной волны 500 нм. Это прояв­ лялось снижением общего уровня метаболической активности с 40—63 до 26—37 уел. ед. ( Staphylococcus aureus (/КО,01), Pseudomonas aeruginosa (/КО,01) и Can­ dida albicans (/КО,05)), а также ростом доли клеток с активными эффлюкс-системами в 2 раза (в куль­ туре Staphylococcus aureus). Этот факт в дальнейшем может послужить основой для разработки метода ле­ чения инфекционных кератитов с применением зе­ леного света в офтальмологии. Участие авторов: Концепция и дизайн исследования: Е.К., И.Н Сбор и обработка материала: И .H., Б.Я. Статистическая обработка данных: И .H., Б.Я. Написание текста: Ю.Б., Е.К., Б.Я. Редактирование: Е.К., И.Н. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. The authors declare no conflicts of interest.

ции бактерий (снижения количества жизнеспособ­ ных клеток) зеленым светом прямо пропорциональна концентрации фотосенсибилизаторов — эритрозина и красителя Rose Bengal [23]. М. Maclean и соавторы в 2008 г. продемонстрировали возможность повреж­ дения бактерий видимым излучением без исполь ­ зования фотосенсибилизатора [24]. В данной ра ­ боте исследована степень инактивации S. aureus при действии света с разными длинами волн видимого диапазона. Было выявлено, что инактивация микро­ организмов происходила под действием излучения с длиной волны в диапазоне 400—500 нм, при этом максимальная инактивация достигалась при облуче­ нии светом с длиной волны 405 нм. Воздействие све­ том с длиной волны более 500 нм не вызывало инак­ тивации 5. aureus. П о зд н е е э то й же груп пой и с сл ед о в а т е л ей была п род ем он стри рован а ин а к ти в аци я других клинически значимых бактерий под действием света с длиной волны 405 нм: количество жизнеспособных грамположительных микроорганизмов ( Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes) снижалось практически до нуля после 120 мин экс ­ позиции. Для инактивации грамотрицательных бак­ терий (Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae) требовалась более длительная экспозиция — 350 мин [25]. Действие излучения с данной длиной волны на клетки грибов не исследовалось. В нашей работе показано, что под действием из­ лучения зеленого спектра, даже в отсутствии фото­ сенсибилизатора, относительная активность метабо­ лизма в микробных клетках (как в бактериях P. aerugi­ nosa и S. aureus, так и в грибах C. albicans) снижалась в большей степени , чем под действием излучения с другими длинами волн (в том числе и 430 нм). По­ лученный результат и его отличия от результатов, описанных в других работах по фотодинамике, мо­ жет быть обусловлен особенностями метода исследо­ вания. Стандартными методами, обычно применяе­ мыми для оценки действия разных спектров света на микроорганизмы , являются подсчет жизнеспособ­ ных микробных клеток — колониеобразующих еди­ ниц, исследование подвижности и термогенеза (для оценки активности метаболизма), изучение целости клеточных структур и активности ферментов, опре­ деление количества внутриклеточных молекул ДНК и АТФ [26]. При применении СЭМ с предваритель­ ным контрастированием лантаноидами активность

AMTEPATYPA/REFERENCES

3. Spoerl E, Wollensak G , Seiler T. Increased resistance o f crosslinked cornea against enzymatic digestion. Curr Eye Res. 2004;29(l):35-40. https://doi.org/10.1080/02713680490513182 4. Corneal collagen crosslinking. Ed: Hafezi F, Randelman BJ. SLACK Incor­ porated. 2013;43-104.

1. Corneal collagcn crosslinking, edited by : Hafezi F, Randelman BJ. SLACK Incorporated. 2013;43-63. 2. Spoerl E, Wollensak G , Dittert D, Seiler T. Thermomechanical behavior of collagen-cross-linked porcine cornea. Oplithalmologica. 2004;218(2): 136-140. https://doi.org/10.1159/000076150

48

ВЕСТНИК ОФТАЛЬМОЛОГИИ 6, 2020